鱼油产品中EPA、DHA含量测定气相色谱仪

普瑞GC-9280型气相色谱分析法通过新的样品处理方法和相应色谱条件的选择，实现对鱼油等保健品中EPA、DHA的含量测定。普瑞GC-9280型气相色谱分析法通过直接加入2，6-二叔丁基对甲酚(bht)、内标二十三酸甲酯、盐类物质来配置标准品和样品溶液，直接进样进行测定。通过对此方法做了方法学验证，专属性好，无杂质干扰；线性关系：r2＝0.9998；精密度6针EPA含量rsd为0.49％，DHA含量rsd为0.36％；回收率EPA达到99.5％，DHA达到99.7％。各项验证指标良好，均符合法规要求。且本方法测定简便易行，适用于工业生产中不同批次鱼油样品的测定。

作为优选，样品溶液的配制方法：

鱼油原料：称取20mg样品于玻璃瓶中，按照衍生化部分描述进行操作；

鱼油软胶囊：取20粒软胶囊的内容物于一烧杯中，充分混合，确保不分层，然后按照衍生化部分描述进行操作。

与现有技术相比，普瑞GC-9280型气相色谱分析法具有如下显著优点：

1、普瑞GC-9280型气相色谱分析法是以GC法测定鱼油中EPA和DHA的含量，而且此GC法适用于软胶囊、鱼油原料中EPA和DHA含量的测定。

2、普瑞GC-9280型气相色谱分析法先用20g/l氢氧化钠-甲醇溶液与样品进行皂化反应后，再用三氟化硼-甲醇溶液与样品溶液进行反应，可更彻底甲酯化样品。

3、用bht异辛烷溶液溶解样品，除易于溶解相应样品外，bht还能起到抗氧化作用，减少样品处理过程中的损失。

4、内标法的运用，保证检测结果的准确。

5、色谱柱选择hpinnowax，30m×0.25mm，0.25μm,能更好的对组分进行分离的同时，节约仪器运行时间。

6、根据鱼油中各组分沸点的不同，对柱温温度进行选择，能更好分离样品，节约仪器运行时间。

以下所用试品及试剂：

试剂：丁羟甲苯(bht)：分析纯；二十三酸甲酯：标准品；氢氧化钠：分析纯；甲醇：色谱级；14％三氟化硼甲醇溶液：分析纯；异辛烷：色谱级；氯化钠：分析纯；无水硫酸钠：分析纯；水：超纯水。

标准品：EPA甲酯批号：bcbm9475v，纯度：≥98.5％，来源：sigma-aldrich

DHA甲酯批号：bcbn2286v，纯度：≥98.5％，来源：sigma-aldrich；

样品：1.鱼油软胶囊，2.鱼油原料，

例1鱼油软胶囊中EPA、DHA含量的测定

鱼油软胶囊EPA和DHA含量的测定：

(1)bht溶液

取50mgbht溶于1000ml异辛烷。

(2)内标溶液

精密称取150mg二十三酸甲酯于25ml容量瓶，用bht溶解，并稀释至刻度。

(3)对照品溶液的配制：

分别精密称取16mgEPA标准品、12mgDHA标准品于10ml容量瓶，用内标溶液溶解，并稀释至刻度线。

(4)样品处理：

成品(软胶囊)：取20粒软胶囊的内容物于一烧杯中，充分混合，确保不分层。然后按照衍生化部分描述进行操作。

(5)衍生化：

移取2.0ml内标溶液于每一玻璃瓶中，氮气吹干；加入1.5ml20g/l的氢氧化钠-甲醇溶液，拧紧聚四氟乙烯瓶帽；水浴加热并搅拌7min。冷却至室温；加2ml三氟化硼甲醇溶液，拧紧瓶帽；水浴加热，并时时振摇30min；冷却至40～50℃，加入1ml异辛烷；转移溶液至20ml试管；加盖，并快速振摇30s；立刻加入5ml饱和氯化钠溶液于玻璃瓶中；加盖，彻底完全振摇15s；转移上层液于10ml试管；用1ml异辛烷重复萃取；分两次用1ml水冲洗异辛烷层；用无水硫酸钠干燥，得到待检测样品溶液。

(6)采用气相色谱仪对样品进行检测：

色谱条件：进样量1μl，

a)色谱柱：hpinnowax，30m×0.25mm，0.25μm；

b)载气：氮气；

c)柱温：170℃，保持5min；1.5℃/min至188℃保持2min；1.0℃/min